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技術(shù)文章

檢測(cè)細(xì)胞因子生物活性的方法點(diǎn)擊次數(shù):1521 更新時(shí)間:2018-01-23

 細(xì)胞因子的檢測(cè)方法一.生物學(xué)檢測(cè)法
  生物學(xué)檢測(cè)又稱生物活性檢測(cè),是根據(jù)細(xì)胞因子特定的生物活性而設(shè)計(jì)的檢測(cè)法。由于各種細(xì)胞因子具有不同的活性,例如IL-2促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖,TNF殺傷腫瘤細(xì)胞,CSF刺激造血細(xì)胞集落形成,IFN保護(hù)細(xì)胞免受病毒攻擊,因此選擇某一細(xì)胞因子*的生物活性,即可對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。生物活性檢測(cè)法又可分為以下幾類(lèi):
  1.細(xì)胞病變抑制法
  病毒可造成靶細(xì)胞的損傷,干擾素等則可抑制病毒所導(dǎo)致的細(xì)胞病變,因此可利用細(xì)胞病變抑制法檢測(cè)這類(lèi)因子。
  2.細(xì)胞因子誘導(dǎo)的產(chǎn)物分析法
  某些細(xì)胞因子可刺激特定細(xì)胞產(chǎn)生生物活性物質(zhì),如IL-2、IL-3誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞合成胺、IL-6誘導(dǎo)肝細(xì)胞合成α1-抗糜蛋白酶等。通過(guò)測(cè)定所誘生的相應(yīng)產(chǎn)物,可反映細(xì)胞因子的活性。
  3.靶細(xì)胞殺傷法
  是根據(jù)某些細(xì)胞因子(如TNF)能在體外殺傷靶細(xì)胞而設(shè)計(jì)的檢測(cè)方法。通常靶細(xì)胞多選擇體外長(zhǎng)期傳代的腫瘤細(xì)胞株,利用同位素釋放法或染料染色等方法判定細(xì)胞的殺傷率。
  4.細(xì)胞增殖法
  許多細(xì)胞因子具有細(xì)胞生長(zhǎng)因子活性,特別是白細(xì)胞介素,如IL-2刺激t細(xì)胞生長(zhǎng)、IL-3刺激肥大細(xì)胞生長(zhǎng)、IL-6刺激漿細(xì)胞生長(zhǎng)等。利用這一特性,現(xiàn)已篩選出一些對(duì)特定細(xì)胞因子起反應(yīng)的細(xì)胞,并建立了只依賴于某種因子的細(xì)胞系,即依賴細(xì)胞株(簡(jiǎn)稱依賴株)。這些依賴株在通常情況下不能存活,只有在加入特定因子后才能增殖。例如IL-2依賴株ctll-2在不含IL-2的培養(yǎng)基中很快死亡,而加入IL-2后則可右體外長(zhǎng)期培養(yǎng)。在一定濃度范圍內(nèi),細(xì)胞增殖與IL-2量呈正比,因此通過(guò)測(cè)定細(xì)胞增殖情況(如使用3h-tdr摻入法、MTT法等)鑒定IL-2的含量。除依賴株外,還有一些短期培養(yǎng)的細(xì)胞,如胸腺細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、促有絲分裂原刺激后的淋巴母細(xì)胞等,均可作為靶細(xì)胞來(lái)測(cè)定某種細(xì)胞因子活性。
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