R&D systems公司 ELISA 酶聯(lián)吸附免疫法Q&A

問：R&D Systems的Quantikine試劑盒是否可用于組織勻漿（或其它未經(jīng)檢驗的）樣本？

答：很遺憾，R&D Systems尚未采用組織勻漿作為樣本對Quantikine系列的試劑盒做效果驗證。如果要決定試劑盒是否可用于未經(jīng)檢定的樣本，實驗者先做一個 “摻入和回收預(yù)試驗"。簡單來說，實驗者將樣本分為兩份：一份中摻入一定量的試劑標準，然后做一稀釋系列（一般稀釋到1:16），再將摻入過的一份同未摻 入的一份相比。采用以下的公式來計算回收率（%）：測試值（pg /毫升）/ 期待值（pg /毫升）x 100% = % 回收率。一般來說，回收率在80-120%可認為是可接受的。但是，可接受范圍應(yīng)由每一實驗室自行決定。這種方法可用于檢定未被R&D Systems檢定的任何樣本。我們還有更加詳細的“摻入和回收"的實驗步驟，可向我們的技術(shù)服務(wù)部索取。我們也可進一步查閱文獻看一看是否有其他試驗人 員用我們的產(chǎn)品做過不同的樣本，或不同的屬種。

問：加入稀釋劑是否會將樣本進一步稀釋？

答：因為稀釋劑是加入到所有的孔中，標準和被測樣本都被同樣稀釋，所以樣本的濃度可從標準曲線讀出，而不需作稀釋調(diào)整。

問：我是否可將標準曲線的兩端延伸？

答：在任何情況下，我們都不支持超出確定范圍的實驗結(jié)果。在我們確定的測試范圍，我們保證實驗結(jié)果的可重復(fù)性。

問：為什么不將測試范圍延伸到所述的靈敏度？

答：靈敏度是統(tǒng)計中大于零的可測到的zui低值。它是通過本底信號和試驗的可變性計算出來的。靈敏度是將20個零復(fù)制物的中值加兩個標準差從標準曲線換算成分析物的濃度。而zui低標準是我們可以放心的、仍可與標準曲線成直線相關(guān)的zui低點，因而是可定量的。

問：Quantikine試劑盒中的試劑是否可互換？

答：如果試劑盒(RD1-, RD5-, RD6-)中的稀釋劑有相同的組件號和批量號，它們可以互換。R&D Systems做“整個試劑盒的質(zhì)量控制"，就是說，我們不支持不同批號之間的替代。在任何情況下，微孔板和共軛物都不可互換。

問：Quantikine試劑盒中的洗液是否可互換？

答：如果組件號相同，洗液在相同類型的試劑盒之間（普通試劑盒之間，或高靈敏度試劑盒之間）是可以互換的。但是，普通Quantikine試劑 盒中的洗液不能用于高靈敏度的試劑盒，在普通Quantikine試劑盒中的洗液含有磷酸，會干擾高靈敏度Quantikine試劑盒中由NADPH驅(qū)動 的信號擴增。

問：在某些實驗中為什么必須使用聚丙烯（polypropylene）的試管做標準稀釋？

答：有些細胞分子會粘到玻璃或聚苯乙烯（polystyrene），但不粘聚丙烯。

問：在Quantkine試劑盒中沒有足夠的RD5校正物來稀釋我的細胞上清液，我該怎么辦？

答：你可用細胞培養(yǎng)液來做起始的稀釋，直接移液到微孔板的zui終的1:10稀釋可使用校正物來稀釋。